该酶在ATP的存在下，能催化氨基酸的活化以及与对应tRNA的结合反应。氨基酰-tRNA合成酶位于胞液，具有绝对专一性，对氨基酸及tRNA都能高度特异地识别。因此，在胞液中至少有20种以上的氨基酰-tRNA合成酶，这些酶的高度专一性是保证翻译准确性的关键因素。