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于发病1周内的钩体血症期，在抗生素治疗前以无菌操作抽取静脉血，即刻接种进行培养或动物实验，此时的阳性检出率较高。患者于发病1周左右开始出现IgM特异性抗体，随后是IgG，于病程1个月左右其效价达高峰，抗体可持续数月至数年。常于发病初期和恢复期采取双份血液，测定血清抗体滴度的消长；或采集单份血样测定IgM抗体，有助于早期诊断。尿液发病第2周起患者尿中逐渐出现钩体，第3周达高峰。由于肾脏中钩体不受血液中特异性抗体的影响，故患者持续从尿液中排菌可达数周之久。留取标本前需碱化尿液。发病1周内患者出现脑膜炎症状，在抗生素治疗前于无菌条件下做腰穿，收集脑脊液。当疑有钩体病的患者或动物死亡后，在最短的时间内取其肝脏或肾脏组织。